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技術(shù)文章

恒遠(yuǎn)生物|細(xì)胞復(fù)蘇

點(diǎn)擊次數(shù)：14209   發(fā)布時(shí)間：2024/3/21 10:03:20

細(xì)胞復(fù)蘇的原則
 
快速融化：必須將凍存在-196℃液氮中的細(xì)胞快速融化至37℃，使細(xì)胞外凍存時(shí)的冰晶迅速融化，避免冰晶緩慢融化時(shí)進(jìn)入細(xì)胞形成再結(jié)晶，對細(xì)胞造成損害。
 
一. 實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備：
 
1.將水浴鍋預(yù)熱至37℃
 
2.用75％酒精擦拭紫外線照射30min的超凈工作臺臺面。
 
3.在超凈工作臺中按次序擺放好消過毒的離心管、吸管、培養(yǎng)瓶等。
 
二．取出凍存管：
 
1.根據(jù)細(xì)胞凍存記錄按標(biāo)簽找到所需細(xì)胞的編號。
 
2.從液氮罐中取出細(xì)胞盒，取出所需的細(xì)胞，同時(shí)核對管外的編號。
 
三．迅速解凍：
 
1.迅速將凍存管投入到已經(jīng)預(yù)熱的水浴鍋中迅速解凍，并要不斷的搖動，使管中的液體迅速融化。
 
2.約1-2min后凍存管內(nèi)液體溶解，取出用酒精棉球擦拭凍存管的外壁，再拿入超凈臺內(nèi)。
 
四.平衡離心：
 
用架盤天平平衡后，放入離心機(jī)中3000r/min 離心3min 
 
五.制備細(xì)胞懸液：
 
1.吸棄上清液。
 
2.向離心管內(nèi)加入10ml培養(yǎng)液，吹打制成細(xì)胞懸液。
 
六.細(xì)胞計(jì)數(shù)：
 
細(xì)胞濃度以5×105/ml為準(zhǔn)。
 
七.培養(yǎng)細(xì)胞：
 
將復(fù)合細(xì)胞計(jì)數(shù)要求的細(xì)胞懸液分裝入培養(yǎng)瓶內(nèi)，將培養(yǎng)瓶放入37℃5％CO2的培養(yǎng)箱內(nèi)2-4小時(shí)（或者24-48小時(shí)）后換液繼續(xù)培養(yǎng)培養(yǎng)，換液時(shí)間由細(xì)胞情況而定。
 
特別注意初學(xué)者常犯的錯(cuò)誤：
 
1水浴鍋未預(yù)熱或者未預(yù)熱到37℃。
 
2.水浴鍋內(nèi)凍存管太多，導(dǎo)致傳熱不佳，使融化時(shí)間延長。
 
3.離心忘記平衡，導(dǎo)致離心機(jī)損壞和細(xì)胞丟失。
 
4.一次復(fù)蘇細(xì)胞過多，忘記更換吸頭和吸管，導(dǎo)致細(xì)胞交叉污染。

原創(chuàng)作者：上海恒遠(yuǎn)生物技術(shù)發(fā)展有限公司

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