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ELISA試劑盒操作步驟

點(diǎn)擊次數(shù):15473   發(fā)布時間:2012/7/12 13:48:35

ELISA試劑盒操作步驟

1.   使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差。

2.   根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。

3.   加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育45分鐘。

4.   甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作4次。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。

5.   每孔加入100ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。

6.   甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作4次。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。

7.   每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育5分鐘。避免光照。

8.   取出酶標(biāo)板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。

9.   在450nm波長處測定各孔的OD值。

ELISA試劑盒結(jié) 果 判 斷 與 分 析

1、  儀器值:于波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD

2、  以吸光度OD值為縱坐標(biāo)(Y),相應(yīng)的IFN-Α標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)(X),做得相應(yīng)的曲線,樣品的IFN-Α含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度,再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。

3、  檢測值范圍: 0-1000pg/ml

4、  敏感度:3.9pg/ml

 

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原創(chuàng)作者:上海恒遠(yuǎn)生物技術(shù)發(fā)展有限公司

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